【原创】
论文思路: 1 验证冷引起的抑制根的生长与DELLA的积累相关。 a 验证DELLA蛋白在冷胁迫下抑制植物生长(冷处理下野生型与DELLA突变体根受抑区别,但随着冷处理时间延长,这种差别越来越小,说明长时间下还有别的factor参与); b验证了冷引起DELLA积累。(融合GFP,冷处理后RGA蛋白水平上升,而且发生在转录后(RNAgel blot)。
2验证冷胁迫通过DELLA-Dependent的CBF cold response pathway抑制植株生长 转CBF1拟南芥表型上矮小,开花延迟,和GA缺陷体表型相似,GA处理后,表型恢复正常,因此,CBF抑制生长是通过GA信号途径的。另外,对DELLA突变体超表达CBF,发现表型同野生型一样,进一步证明CBF抑制生长是通过DELLA的;验证CBF引起DELLA积累的程度。将CBF超表达拟南芥和融合GFP的转RGA拟南芥杂交,发现在根冠伸长区表达量明显上升,而且这种积累是在转录后发生的。 3 验证CBF引起DELLA积累是通过改变GA代谢中一些基因(GA 2-Ox)的表达。 GA20ox/3ox合成生物活性的GA,而GA 2-Ox引起GA失去生活活性。推测冷诱导CBF是通过减少GA20ox/3ox,或增加GA 2-Ox。但是检测转CBF拟南芥,发现冷/CBF引起DELLA的积累不是由于抑制GA20ox/3ox引起的,发现冷4h,出现上升,因为GA存在反馈抑制,冷/CBF引起DELLA的积累;而GA2ox表达量上升。 4 DELLA参与CBF引起的提高抗冻性。 5 CBF1 also enhances freezing tolerance through the synergistic DELLA-dependent and COR-dependent pathways.(在野生型及DELLA突变体中未发现CBF诱导的marker基因的表达)
本文思路很清晰,而且最后推测的信号通路以及下面那段结论性的话很好。 |