| | | | | | | | 生工F-2：100g, 140元，BBI产，Cat#: AB1032 | | | | | | 生工F-110：1g, 55元，AMRESCO产，Cat#: S0485 | | | 生工：150 ml, 86元，BBI产，Cat#: T0761 | | | 华舜：25g, 42元，Sigma产，Cat#:A6761 | | | | | | 生工F-47：1g, 55元，BBI产，Cat#: DB0058 | | | 华舜：5g, 70元，AMRESCO产，Cat#: 0312 | | | | | | | | | | | | | | | | | | Invitrogen, Cat#: LC5602. (敖永琴, 2270元) | | | | | | | | | | | western blot striping buffer | PIERCE公司, Cat#: 21059, 吉泰（1043元）、基因公司代理。 |
SDS-PAGE、蛋白转印、Western Blot试剂原料一览表 SDS-PAGE、蛋白转印、Western Blot试剂配制 (***整理，2004.9.6) 1.5 mol/L Tris (PH8.8) 1．称量181.7g Tris置于1L烧杯中。 2．加入约800 ml去离子水，充分搅拌溶解。 3．用浓盐酸调节pH值至8.8。 4．定容至1L. 5．高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1oC，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 （参照kara公司Catalog-N1） 1 mol/L Tris (PH6.8) 1．称量121.1g Tris置于1L烧杯中。 2．加入约800 ml去离子水，充分搅拌溶解。 3．按下表量加入浓盐酸调节所需的pH值。 4．定容至1L. 5．高压灭菌后，室温保存。 注意：1.溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1oC，溶液的pH值大约降低0.03个单位。2. 如1 mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃，并置备质量更好的Tris。 （参照kara公司Catalog-N1） 30％丙稀酰胺（100ml） 1．称量下列试剂置于烧杯中。 2．加入约60 ml去离子水，充分搅拌溶解。 3．定容至100 ml, 用0.45 µm滤膜滤去杂质。 5．于棕色瓶中4
oC保存。 注意：1. 丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成分。 （参照kara公司Catalog-N1和《分子克隆》二版P924） 30％ SDS 1．称量10 g
高纯度（电泳级）的SDS置于100~200 ml烧杯中。 2．加入约800 ml去离子水，68oC加热溶解。 3．滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。 4．定容至100 ml，室温保存。 （参照kara公司Catalog-N1和《分子克隆》二版P924） 10％ 过硫酸铵 1．称量1 g过硫酸铵。 2．加入约10 ml去离子水后搅拌溶解。 3．储存于4oC。 注意：10％过硫酸铵溶液在4oC保存时可使用两周左右，超过期限会失去催化作用。 （参照Takara公司Catalog-N1和《分子克隆》二版P924） 1×SDS凝胶加样缓冲液 不含DTT的1×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温，临用前必须从1 mol/L DTT储存液中现用现加于上述缓冲液中。 （参照《分子克隆》二版P884） 本人将参照此配方，配成5×或6×，各成分浓度均扩大5倍。 另:Takara公司Catalog-N5上的5×SDS－PAGE Loading Buffer配方： 组分浓度： 配制量 5 ml 配制方法 2．加去离子水溶解后定容至5 ml。 3．小份（500 ul/份）分装后于室温保存。 4．使用前将25 ul的2-ME加到每小份中。 5．加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右。 1 mol/L DTT (20 ml) 1．称取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料离心管中。 2．加20 ml的0.01 M NaOAc (pH5.2)，溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。 3．分装后－20oC保存。 （参照《分子克隆》二版P884） 3 M
醋酸钠（NaOAc）（100 ml） 1．称取40.8 g NaOAc·3H2O置于100～200ml烧杯中，加入约40ml的去离子水后搅拌溶解。 2．加冰醋酸调节pH值至5.2。 3．定容至100 ml，高压灭菌后室温保存。 （参照《分子克隆》二版P884） 0.01 M NaOAc (pH5.2)
参照此配方配制。 5×Tris-Glycine Buffer（SDS-PAGE电泳缓冲液） 组分浓度：0.125 M Tris, 1.25 M Glycine, 0.5%(W/V) SDS 1．称量下列试剂置于烧杯中。 2．加入约900 ml去离子水搅拌溶解。 3．定容至1L，室温保存。 （参照《分子克隆》二版P884） Transfer Buffer: [自配] Transfer Buffer:500ml 25mM Tris base, 0.2M glycine（甘氨酸）, 20% methanol(甲醇PH8.5) 先配制1M Tris base (MW:121.1) 100ml: 12.1g Tris base + ddH2O至100ml,PH约11 1M 12.5ml Tris base + 7.5g glycine(MW:75.05) +100ml methanol
+ ddH2O 至400ml,调好PH值，再加ddH2O至500ml.
先置于4oC保存备用。 （参照吴兴军给Protoco, 据说优于《分子克隆》配方） 丽春红S储存液（10×） 用1份上述储存液加9份去离子水即成丽春红S使用液，使用后应予废弃。 10X TBS (Tris-buffered saline): To prepare 1 liter of 10X TBS: 24.2 g Tris base, 80 g NaCl; adjust pH to 7.6 with HCl (use at 1X). （参照Cell signal Technology Protoco） Wash Buffer TBS/T: 1X TBS, 0.1% Tween-20 [自配] Wash Buffer TBS/T:1000ml 1×TBS,0.1%Tween-20,100ml 10×TBS+ 1ml Tween-20
+ 900ml ddH2O （参照Cell signal Technology Protoco） Blocking Buffer: 1X TBS, 0.1% Tween-20 with 5% w/v nonfat dry milk。 [自配 Blocking buffer:150ml for 150ml, add 15ml 10×TBS to 135 ml water,mix.Add 7.5g nonfat milk and mix well.While strirring,add 0.15ml Tween-20(100%). (现用现配，4oC储存备用) （参照Cell signal Technology Protoco） Primary Antibody Dilution Buffer: 1X TBS, 0.1% Tween-20 with 5% blocking agent; for 20 ml, add 2 ml 10X TBS to 18 ml water, mix. Add 1.0 g BSA and mix well. While stirring, add 20 µl Tween-20 (100%). （参照Cell signal Technology Protoco） | 
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发表于 2010-12-31 13:19:57